近期，我们收到了老师们关于《农业部 1025号公告-23-2008》测试过程的反馈，其中磺胺类物质回收率偏低的问题较为突出。为了解决这一问题，我们从实验原理、操作流程等多个角度进行深入分析，对实验过程的每一个环节都进行了细致的排查和优化，采用Copure® 磺胺专用柱进行测试，最终有效地提高了磺胺类物质的回收率，使其能够满足标准要求测试。
1、 样本提取
称取5g猪肉样品置于50mL离心管中，加入15mL乙酸乙酯涡旋振荡20min，5000r/min离心10min，上清液收集于50mL离心管中，再加入10mL乙酸乙酯重复提取1次，合并乙酸乙酯层。在提取液中加入5mL 0.1mol/L盐酸溶液，将乙酸乙酯层进行45℃氮吹干，向离心管中加入2mL 0.1mol/L盐酸溶液，涡旋混匀；再加入5mL正己烷，手动振摇20次，4000r/min 离心5min，弃去正己烷，下层水相作为待净化液。
Tips：a.氮吹乙酸乙酯前需先加入0.1mol/L盐酸溶液，使磺胺离子化，以免氮吹过程损失，提取液浓缩尽量选择氮吹，避免使用旋蒸。
b.正己烷除脂过程中，离心后易出现乳化，观察分层界面是否清晰，若下层水相体积少于7mL，极有可能有部分乳化现象，先不要分离出正己烷层，再加入5mL正己烷振摇后离心。
c. 0.1mol/L盐酸溶液：量取8.3mL浓盐酸，用水定容至1L。
2 、SPE柱净化
色谱柱：（Copure® 磺胺专用柱，150mg/6mL）
活化：使用前依次用3mL甲醇、3mL 0.1mol/L盐酸活化柱子
上样：将待净化液转移至固相萃取柱中
淋洗：依次用2mL0.1mol/L盐酸、2mL 甲醇-乙腈（50-50）溶液洗涤小柱
洗脱：用6mL 5%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液。
复溶：洗脱液于45℃下氮气吹干（备注：氮吹时间不宜过长，避免目标物损失），残留物用1mL 0.1%甲酸水-甲醇（9:1）溶液复溶，超声1min后涡旋混匀，过0.22μm亲水型PTFE微孔滤膜后，供LC-MS/MS检测, 采用溶剂标曲内标定量。
3、 标准工作液配制
分别量取适量磺胺中间液1μg/mL和2种磺胺内标中间液，用 0.1%甲酸水-甲醇（9:1）溶液逐级稀释成5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL，其中内标浓度为40ng/mL的标准工作液（除磺胺二甲异噁唑、磺胺喹恶啉、磺胺间二甲氧嘧啶以氘代磺胺间二甲氧嘧啶-D6为内标，其他磺胺类物质均以氘代磺胺邻二甲氧嘧啶-D3为内标）。
4、仪器条件
- 仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
- 色谱柱：Copure®兽残专用HPLC柱（2.1 mm×100 mm，3μm）
- 流动相：A：水（0.1 %甲酸） B：含0.1 %甲酸的甲醇-乙腈溶液（甲醇:乙腈=2:8）
- 洗脱方式：梯度洗脱，见表1
- 流速：0.4 mL/min
- 柱温：35℃
- 进样量：3μL
- 质谱条件
- 离子源：HESI
- 电喷雾电压：3500 V
- 鞘气压力：40 arb
- 辅气压力：2 arb
- 离子传输管：380 ℃
- 辅气温度：350 ℃
- 定性、定量离子对见表2
5 、检测结果
6 、订购信息
