EDTA二钠(又称乙二胺四乙酸二钠,Disodium EDTA),是GB 2760允许使用的一种食品添加剂,其限量值分别为:饮料类(包装饮用水类除外)0.03 g/kg;果酱、蔬菜泥(酱)(番茄沙司除外)等0.07 g/kg;腌渍菜、蔬菜罐头、坚果与籽类罐头、八宝粥罐头、地瓜果脯等0.25 g/kg。
逗点生物根据标准GB 5009.278-2016进行优化,使用EDTA强阴离子交换专用SPE小柱结合高效液相方法对橙汁、梨罐头、罐装八宝粥、鸡粉、玉米粉、西梅蜜饯、芒果干和腌制酸菜等八种基质中乙二胺四乙酸二钠进行检测,定量限回收率均在90%以上,方法简单易行。

一、样品前处理

与水互溶:橙汁
称取试样5g(精确至0.01g),置于50 mL玻璃比色管中,加入25 mL水,涡旋混匀,超声提取20 min后,加水定容至50 mL。吸取5 mL上清液于15 mL离心管中,待络合。
不溶于水:梨罐头、罐装八宝粥、鸡粉、玉米粉、西梅蜜饯、芒果干
称取试样5 g(精确至0.01g),置于50 mL离心管中,加入25 mL水,涡旋混匀,超声20 min,10000 r/min离心5 min,取上清液置于50 mL玻璃比色管中。剩余残渣重复提取一次,离心后合并上清液,加水定容至50 mL。吸取5 mL定容液于15 mL离心管中,待络合。
带油脂:腌制酸菜
称取试样5 g(精确至0.01g),置于50 mL离心管中,加入25 mL水,涡旋混匀,超声20 min,10000 r/min离心5 min,取上清液置于50 mL玻璃比色管中。剩余残渣重复提取一次,离心后合并上清液,此时上层会有些许油脂,加水将分层面到50mL刻度线。往比色管中加入5mL正己烷,轻轻摇晃数下,静置分层后。吸取5 mL下层液于15 mL离心管中,待络合。
络合
向上述提取溶液中加入0.5 mL三氯化铁溶液,涡旋混匀1 min,超声20 min,10000 r/min离心5min,待净化。
注:三氯化铁溶液:称取0.54g三氯化铁(FeCl3.6H2O),溶于90 mL水中,加入0.10 mL盐酸(分析纯),转移到100 mL容量瓶中,用水定容至刻度,混匀。

二、SPE净化

活化:5 mL甲醇
平衡:5 mL水
上样:将待净化液全部上样过柱
淋洗:依次用5 mL水、5 mL甲醇淋洗,抽干
洗脱:5 mL 7%甲酸甲醇水溶液(甲酸:甲醇:水=7:18:75)洗脱,抽干,收集洗脱液定容至5 mL,过亲水PTFE滤膜,供液相色谱仪测定。

三、仪器条件

设备:Thermo Scientific UltiMate 3000
色谱柱:CommaSil® C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 
检测器:紫外检测器
流动相:甲醇:四丁基溴化铵-乙酸钠混合溶液(pH4.0) =15:85
流速:0.8 mL/min
柱温:35 ℃
进样体积:10 µL

四、 实验图谱

图1  3ppm标准溶液乙二胺四乙酸二钠络合物液相色谱图
图2 八种基质加标叠加液相色谱图

五、实验结果

六、注意事项

6.1、试样加提取液后先将样品涡旋混匀后再超声。
6.2、加入三氯化铁络合前,先涡旋混匀后再超声
6.3、络合后玉米粉和鸡粉会产生大量沉淀,适当提高离心转速和时间,保证样液澄清,过柱时便于目标物的吸附。
6.4、离心后的络合液若不能及时过柱,可先转移出来,以免样液再变浑浊。
6.5、固相萃取时,整个过程控制好流速,尽量靠重力,若加压需要控制流速1滴/秒。
6.6、洗脱液配制时,需要注意甲酸的浓度及比例,7%甲酸甲醇水溶液(甲酸:甲醇:水=7:18:75),尽量不要用放置过久的甲酸,酸度不够会洗脱不完全。

七、订购信息

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