一、GB4789.3-2016 大肠菌群平板计数法
1.1 大肠菌群平板计数法流程图
1.2 操作注意事项
• 平板法相对 MPN 法来说，结果更加直观精准。长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3 或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。适用与污染较为严重的样品。
• 从一个样品取样到倾注琼脂平板，应在 15 分钟内完成。
• 检验所用物品应无菌，无抑菌残留物。
BGLB 确证试验需从 VRBA 平板上挑起至少 10 个典型和可疑菌落进行，如平板上菌落数少于 10 个，则挑取全部典型和可疑菌落进行确证。
二、GB4789.3-2016培养基原理解析
2.1 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
• 配方中胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌，中性红作为指示剂，在酸性条件下为紫红色。
• 大肠菌群分解乳糖所产的酸与胆盐结合，可形成粉红色菌落，菌落周围有胆酸盐沉淀环。
• 该培养基无需高温高压灭菌，现配现用。
三、计数与报告
3.1 结果判读
选取菌落数在 15 CFU ～ 150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为 0.5 mm 或更大。
3.2 证实试验
从接种同一样品浓度的 VRBA 平板上共挑取 10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于 BGLB 肉汤管内，36℃ ±1℃培养 24 h ～ 48 h，观察产气情况。凡 BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
3.3 大肠菌群平板计数的报告
• 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以计数的平板菌落数 , 再乘以稀释倍数 , 即为每 g(mL) 样品中大肠菌群数。
例：10-4 样品稀释液 1mL，在 VRBA 平板上有 100 个典型和可疑菌落，挑取其中 10 个接种 BGLB 肉汤管，证实有 6 个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104 /g(mL)=6.0×105 CFU/g(mL)。
• 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。
四、质量控制
4.1 实验过程中，每批样品稀释液都要做空白对照。
4.2 为了控制环境污染，每次检验过程中，于检验台上打开两块计数琼脂平板，并在检验环境中暴露不少于 15 分钟，将此平板与本批次样品同时进行培养，以掌握检验过程中是否存在来自检验环境的污染。
4.3 定期使用大肠埃希氏菌 ATCC25922 或相应定量活菌参考品，在 P2 实验室或阳性对照实验室内，用适当的食品样品进行阳性实验验证，并进行记录，此次验证实验至少每 2 个月进行 1 次。