着色剂具有改善食品色泽、增进人们食欲的作用,因其成本低、色泽鲜艳、着色力强、稳定性好等特点,在食品生产加工行业中被广泛应用。

但食用合成着色剂常以苯、甲醛等化工产品为原料, 经磺化、卤化等化合而成,易混入有毒有害物质,有潜在的毒性和致癌性。因此,各国对食品中合成着色剂的使用范围和使用限量都有严格规定,GB 2760—2014《食品添加剂使用卫生标准》明确严格规定了合成色素的使用限量和范围。

本实验开发了不同样品基质中合成着色剂测定的固相萃取方法,本法操作简便,回收率好,满足检测要求。

一、样品提取

1.1 液体及部分固体试样(饮料类、果冻等)

称取试样2 g于50 mL离心管中,加入25 mL乙醇氨水溶液,涡旋1 min,50 ℃超声提取15 min,8000r /min离心5 min。

取上清液置于50 mL离心管中,加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,混匀后得提取液。

准确吸取提取液10 mL,50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右,加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,混匀作为待净化液。

SDC-3000-D 多管旋涡混匀仪

1.2 含油量较大的试样(糕点、酱卤肉、薯片等)

称取试样2 g于50 mL离心管中,加入20 mL石油醚,涡旋1 min,涡旋振摇10 min,以8000r /min离心5 min,弃去上清液,除尽石油醚溶剂,加入25 mL乙醇氨水溶液至除油试样中,涡旋1 min,50 ℃超声提取15 min,8000r /min离心5 min。

取上清液置于50 mL离心管中,加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,混匀后得提取液。

准确吸取提取液10 mL,50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右,加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,混匀作为待净化液。

乙醇氨水溶液:无水乙醇700mL,氨水4mL,用水稀释定容到1L,混匀即得。

二、样品净化

活化:固相萃取柱依次用6mL甲醇和6mL水活化

上样:将上述待净化液过柱,弃掉流出液

淋洗:依次用6 mL水和6ml甲醇淋洗,抽干小柱

洗脱:6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱,收集洗脱液,于45 ℃氮吹仪浓缩至0.3 mL左右,加入乙酸铵溶液(pH=9.0)复溶至2mL,涡旋混匀,过PTFE滤膜,上机。

乙酸铵溶液(pH=9.0):称取1.54g乙酸铵,加水溶解并定容至1000mL,加氨水调pH=9.0.

三、仪器条件

仪器:液相色谱仪,ThermoFisher U3000

色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18 

(4.6 mm×250 mm,5 μm)

流动相:A:0.02mol/L乙酸铵溶液  B:甲醇

洗脱方式:梯度洗脱,见表1

流速:1.0 mL/min      

柱温:30 ℃     

进样量:10 μL

检测器:紫外检测器  

检测器波长范围:400~800 nm,柠檬黄、喹啉黄的测定波长为415 nm;新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、 酸性红、赤藓红的测定波长为520 nm;亮蓝、靛蓝的测定波长为630 nm。

表1 梯度洗脱程序

四、实验结果

【加标回收实验结果】

表2 加标回收结果

【标液、果冻、饮料、蛋糕、酱卤鸭翅根和薯片中着色剂色谱图】

图1 11种合成着色剂标准溶液(5.0 mg/kg)色谱图
图2果冻添加水平(5.0 mg/kg)中11种着色剂色谱图
图3饮料添加水平(5.0 mg/kg)中11种着色剂色谱图
图4蛋糕添加水平(5.0 mg/kg)中11种着色剂色谱图
图5酱卤鸭翅根添加水平(5.0 mg/kg)中11种着色剂色谱图
图6薯片添加水平(5.0 mg/kg)中11种着色剂色谱图

五、订购信息

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