简介
本应用为将biocomma® Copure® SLE 1 mL(Cat.No.COSLE1CC)的液液萃取柱，应用于人血清中皮质甾类药(氢化可的松和曲安西龙)的快速提取和定量。
biocomma® Copure® SLE液液萃取柱提供了一个有效替代传统的液液萃取(LLE)，可用于生物分析样品制备的方法。该柱可以提高分析物的回收率，使萃取过程没有乳状液的形成，并显著降低了前处理过程中的萃取时间。
方法
试剂
分析物、氯化钠和其他试剂(HPLC级)购自阿拉丁(中国)购买。
样品准备工作
样品预处理：
将血清样品纯水稀释并混匀，使样品最终的pH接近8.0。取一部分空白稀释血清备用；剩下的空白稀释血清加入一定体积的氢化可的松和曲安西龙储备液，配制成浓度为1.5 mg/L的氢化可的松和曲安西龙加标血清。
上样：
向SLE柱中加入1 mL预处理的样品，加负压启动流速(5-15秒)，然后让样品吸附于填料中约5分钟。
洗脱：
向柱中加入4 mL乙酸乙酯，使溶剂通过重力流出并收集洗脱液，然后再向柱中加入4 mL的乙酸乙酯。在收集结束后加适当的正力或负压(-15″ Hg)2分钟并收集最终洗脱出的溶剂。
浓缩：
将上述收集的洗脱液于35 ℃左右的温度低真空下浓缩，再用缓氮气流祛除乙醚溶液，使其浓缩至近干。取1 mL(60:40, v/v)的水/甲醇定容，供液HPLC分析。
HPLC条件
设备： Waters Alliance 2695
检测器： Waters 2487 双波长检测器；检测波长：245 nm
色谱柱： Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流动相： A:乙腈 B:0.1%甲酸水溶液
梯度洗脱条件：
流速：1 mL/min
进样体积： 20 μL
柱温： 室温
流速： 1 mL/min
分析物
实验结果
结果如下所示。回收率见表1和图2
表1.氢化可的松和曲安西龙的回收率
图2.曲安西龙和氢化可的松的回收率
结论:biocomma® Copure® SLE液液萃取萃取柱可用于从人体血清中定量回收提取
氢化可的松和曲安西龙。