展青霉素主要存在水果及其制品中,尤其是苹果、山楂、梨、番茄、苹果汁和山楂片等。它会引起胃肠道功能紊乱和各种器官的水肿和出血,对人及动物均具有较强的毒性作用。

展青霉素的国家标准《GB5009.185-2016食品安全国家标准食品中展青霉素的测定》限量水平固体、半流体试样在12 ug/kg检出,定量限为40 ug/kg。


本方法适用于苹果、山楂、番茄、梨等水果果肉中展青霉素的测定。参照《GB5009.185-2016食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定》。

一、样品提取

准确称取1.0 g样品于50 mL离心管中,加入10 mL水与150 uL果胶酶溶液,涡旋混匀1 min,室温下避光放置过夜后,加入10 mL乙酸乙酯,涡旋混匀5 min,在5000 r/min下离心5 min,取上层乙酸乙酯层于50 mL离心管中;再用8 mL乙酸乙酯提取一次,合并两次乙酸乙酯提取液,氮吹至干;以2.0 mL乙酸溶液(10乙酸加入250 mL超纯水配制)溶解残留物,再加入8.0 mL乙腈,混匀后待净化。

二、Copure®多功能净化柱净化

(1)向试管中加入10 mL样品提取液,然后加入50 uL乙酸;
(2)将228净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中,并向下压净化柱至试管底端;
(3)将净化柱上部净化后的样品提取液倒出至样品瓶或者EP管中。
(4)取5 mL净化提取液,加入20 uL乙酸,氮吹至干,用1 mL乙酸溶液(10 mL乙酸加入250 mL超纯水配制)复溶,0.22 um微孔滤膜过滤,上机测试。

三、实验结果

表1. 40 ug/kg苹果果肉中展青霉素的添加回收结果


仪器:Waters Alliance 2695
色谱柱:InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)
检测器:Waters 2996 DAD 紫外检测器
检测波长:268 nm
梯度洗脱
流动相:A水 B乙腈


流速:1.0 mL/min
进样体积:20 μL


图1. 添加水平为40 ug/kg展青霉素检测的液相色谱图

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本方法回收率和RSD满足标准要求。

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