硝基咪唑类抗菌药物（Nitroimidazoles）是一类人工合成的抗菌药物。常见的有甲硝唑、替硝唑等。硝基咪唑类对厌氧菌及原虫有独特的杀灭作用，与其他抗生素联合应用于临床的各个领域。
食品安全监督抽检实施细则（2023年版）中新增了GB 31658.23-2022《猪肉中硝基咪唑类药物残留量的测定》方法。本方法采用Copure® MCX柱，测试了猪肉中的甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑和羟基地美硝唑，优化了相关测试步骤，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的测试方法，可供参考。
一、样本前处理
1.1 样品提取
1）称取 2g猪肉样品于50 mL塑料离心管中，加入0.100μg/mL混合内标工作液100μL，涡旋30s混匀，静置10min。加入乙酸乙酯15mL，振荡10min，9500r/min离心5min，吸取上层清液于另一个50mL离心管中。
2）用15mL 乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，于40℃水浴氮气吹干 。
1.2 净化
1）残余物中加入0.1mol/L盐酸溶液5mL，涡旋1min充分溶解，加正己烷5mL,振摇1min，9500r/min离心5min，弃正己烷层，下层再加正己烷5mL重复除脂一次，弃正己烷层，下层水相备用。
2）用3mL甲醇、3mL 0.1mol/L盐酸溶液依次活化MCX混合型阳离子交换反相固相萃取柱；取全部备用液过柱，依次用3mL 0.1mol/L盐酸溶液、3mL甲醇淋洗，抽干；加5mL 5%氨化甲醇洗脱，抽干，收集洗脱液。
3）将收集的洗脱液于40℃下氮吹至近干，加0.1%甲酸水溶液定容至0.5mL，涡旋30s溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜，上机测定。
.3 标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量，用0.1%甲酸水溶液稀释成浓度为0.500μg/L、1.00μg/L、2.00 μg/L、5.00 μg/L、10.0 μg/L、25.0 μg/L的系列标准工作液，内标为20.0μg/L，过0.22μm微孔滤膜，上机测定。
样品瓶 
针式过滤柱
二、仪器条件
仪器设备：液相色谱-串联四级杆质谱仪 （Triple Quad 5500）
色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7m 2.150mm Column
流动相： A：0.1%甲酸水 B：乙腈
流动相梯度：初始95%A，95%A（0 min~1.00 min），10%A（1.00 min~3.00min），10%A（3.00 min~4.20min），95%A（4.20 min~4.50min）， 95%A（4.50min~5.00min）
流速：0.300 mL/min
柱温：40℃
进样体积：4.0 μL
质谱条件：
检测方式：多反应离子监测（MRM）
保留时间、去簇电压和碰撞能量参考值
注：*为定量离子。
三、实验结果
加标回收实验结果
溶液特征离子质量色谱图 (20.0μg/L)
四、订购信息
