纽甜的介绍
纽甜(Neotame) 是一种新型高倍甜味剂和风味增强剂，目前代表着人类为开发强力甜味剂而取得的最高水平的最新成就。作为一种功能性甜味剂（Functional Sweeteners），纽甜对人体健康无不良影响，起有益的调节或促进作用。美国FDA已于2002年7月9日通过食品添加物审核允许应用在所有食品及饮料。中华人民共和国卫生部2003年第4号公告也正式批准纽甜为新的食品添加剂品种，适用各类食品生产。 它具有以下特点： 1、甜味纯正，清新自然，与阿斯巴甜相似，但安定性较高； 2、甜度高，是砂糖8000倍左右，等甜度成本较阿斯巴甜低； 3、所含的营养物质很容易被人体吸收； 4、低能量或无能量、可供糖尿病人食用、不致龋齿、可促进双歧杆菌增殖等； 5、不会引起蛀牙、血糖波动，是保健型食品的首选甜味剂。
有关纽甜的食品安全限量规定
虽然纽甜对人体健康不会造成影响，但毕竟是属于添加剂，因此国标GB2760-2014中规定纽甜在碳酸饮料中的最大限量是0.033g/kg。逗点生物开发出使用SPE方法检测碳酸饮料中纽甜的含量，回收率在90-100%左右，为客户提供关于纽甜检测有效的解决方案。
实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测饮料（健力宝）中纽甜含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
实验目标物
纽甜（CAS：165450-17-9）。
应用范围
本方法适用于碳酸饮料中纽甜的检测的HPLC检测及确证。
实验材料
biocomma® Copure® C18固相萃取柱500 mg/6 mL（Cat. No. COC186500）;健力宝碳酸饮料。
实验方法
1.样品提取
取健力宝饮料加入烧杯，超声脱气；准确称取除气的健力宝饮料 10.0 mL 于50 mL离心管中加入混合提取液（混合提取液：0.8 mL甲酸+2.5 mL三乙胺加水定容至1000mL，PH约为4.5） 30 mL，涡旋震荡2 min；超声15 min后用混合提取液定容至50 mL。4000 r / min离心10 min，过滤备用。
2.SPE柱活化
(1)活化：C18固相萃取柱使用前用5 mL甲醇、5mL水活化；
(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入10 mL待净化液；弃去流出液；
(3)淋洗：用5 mL混合提取液淋洗固相萃取柱；弃去流出液；抽干；
(4)洗脱：用6 mL甲醇洗脱，收集洗脱液；
(5)重新溶解：洗脱液40 ℃下氮吹至干，用1 mL 混合提取液溶解。经0.45 μm滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
3. HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：218 nm
流动相：A:乙腈 B: 离子对试剂（2.0g辛烷磺酸钠用500 mL水溶解加入1.0 mL磷酸；继续加水定容至1 L）
表1 梯度洗脱条件
流速：1.0 mL/min
进样体积:50 μL
实验结果
1、10 mg/kg饮料中纽甜的添加回收结果
表2 10 mg/kg饮料中纽甜的添加回收结果
2、添加水平为10 mg/kg饮料中纽甜检测的液相色谱图
图1 添加水平为10 mg/kg饮料中纽甜检测的液相色谱图
结论：本方法在饮料中纽甜检测的平均回收率是101.5%，RSD是1.56%。