一、 金黄色葡萄球菌是什么?

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)属于微球菌科葡萄球菌属,是人类的一种重要病原菌,典型的金黄色葡萄球菌为球形,直径0.8μm左右,显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。

金黄色葡萄球菌/图片来源于网络,侵删

二、 金黄色葡萄球菌有什么危害?

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。

金黄色葡萄球菌食物中毒多以夏、秋两季为多。临床表现主要是呕吐和腹泻,严重可导致休克。被污染的食物在室温20-22℃搁置五小时以上,金葡菌就能大量繁殖并产生肠毒素。

金黄色葡萄球菌主要污染营养丰高且含较多水分的食品,如乳类及乳制品、肉类、剩饭等,其次为熟肉类,偶见鱼类及其制品、蛋制品等。

金黄色葡萄球菌在不同乳制品中限量标准

三、 金黄色葡萄球菌的检测原理

初步鉴定

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm-3mm,颜色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。

定性检测方法流程

当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外观可能较粗糙、质地较干燥。

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在血平板上形成菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色),菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

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【确证鉴定

染色镜检:金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,排列呈葡萄球状,无芽胞,无荚膜,直径约0.5μm-1μm。

革兰氏染色液/ 用于细菌或真菌的涂片染色

2)血浆凝固酶试验:挑取Baird-Parker平板或血平板上至少5个可疑菌落(小于5个全选),分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面,36℃±1℃培养18h-24h。

取新鲜配制兔血浆0.5mL,放入小试管中,再加入BHI培养物0.2mL-0.3mL,振荡摇匀,置36℃±1℃温箱或水浴箱内,每半小时观察一次,观察6h,如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时,呈现凝块)或凝固体积大于原体积的一半,被判定为阳性结果。

同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂,按说明书操作,进行血浆凝固酶试验。结果如可疑,挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI,36℃±1℃培养18h~48h,重复试验。

结果与报告

1)结果判定:符合初步鉴定、确证鉴定的可判定为金黄色葡萄球菌。

2)结果报告:在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。

平板计数法流程

典型菌落计数和确认

1)金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm-3mm,颜色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。

当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外观可能较粗糙,质地较干燥。

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2)选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板,且同一稀释度3个平板所有菌落数合计在20CFU-200CFU之间的平板,计数典型菌落数。

3)从典型菌落中至少选5个可疑菌落(小于5个全选)进行鉴定试验。分别做染色镜检,血浆凝固酶试验;同时划线接种到血平板36℃±1℃培养18h-24h后观察菌落形态,金黄色葡萄球菌菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色),菌落周围可见完全透明溶血圈。

【结果计算】

1)若只有一个稀释度平板的典型菌落数在20CFU-200CFU之间,计数该稀释度平板上的典型菌落,,按式(1)计算。

2)若最低稀释度平板的典型菌落数小于20CFU,计数该稀释度平板上的典型菌落,按式(1)计算。

3)若某一稀释度平板的典型菌落数大于200CFU,但下一稀释度平板上没有典型菌落,计数该稀释度平板上的典型菌落,按式(1)计算。

4)若某一稀释度平板的典型菌落数大于200CFU,而下一稀释度平板上虽有典型菌落但不在20CFU-200CFU范围内,应计数该稀释度平板上的典型菌落,按式(1)计算。

5)若2个连续稀释度的平板典型菌落数均在20CFU-200CFU之间,按式(2)计算。

6)计算公式(1):

式中:

T ——样品中金黄色葡萄球菌菌落数

A ——某一稀释度典型菌落的总数

B ——某一稀释度鉴定为阳性的菌落数

C ——某一稀释度用于鉴定试验的菌落数

d ——稀释因子

计算公式(2):

式中:

T——样品中金黄色葡萄球菌菌落数

A1——第一稀释度(低稀释倍数)典型菌落的总数

B1——第一稀释度(低稀释倍数)鉴定为阳性的菌落数

C1——第一稀释度(低稀释倍数)用于鉴定试验的菌落数

A2——第二稀释度(高稀释倍数)典型菌落的总数

B2——第二稀释度(高稀释倍数)鉴定为阳性的菌落数

C2——第二稀释度(高稀释倍数)用于鉴定试验的菌落数

1.1——计算系数

d——稀释因子(第一稀释度)

【报告】

根据公式计算结果,报告每g(mL)样品中金黄色葡萄球菌数,以CFU/g(mL)表示;如T值为0,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。

四、 金黄色葡萄球菌通过什么挥发作用

金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶。

葡萄球菌溶血毒素——按抗原性不同,至少有α、β、γ、δ、ε五种,使人体致病的主要是α-溶血素,可以引起细胞内物质外流最终导致红细胞裂解死亡。

杀白细胞素——含F和S两种蛋白质,能杀死人和兔的多形核粒细胞和巨噬细胞。此毒素有抗原性,不耐热,产生的抗体能阻止葡萄球菌感染的复发。

血浆凝固酶——多数致病菌株能产生凝固酶,分为结合凝固酶和游离凝固酶两种,血浆凝固酶使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白,附于细菌表面,生成凝块。

表皮溶解毒素——也称表皮剥脱毒素,裂解表皮组织棘状颗粒层,导致表皮与真皮脱离。主要发生于新生儿和婴幼儿。

毒性休克综合毒素Ⅰ——此毒素可增加宿主对内毒素的敏感性,使毛细血管通透性增强,引起心血管功能紊乱而引起毒性休克综合征(TSS)。

葡萄球菌表面蛋白A——可与IgG抗体Fc段非特异性结合,竞争性抑制吞噬细胞对细菌的吞噬作用。

肠毒素——金葡菌可产生A、B、C、D、E、F等多种肠毒素,对热抵抗力极强,加热煮沸30分钟仍可保持毒力而致病。金葡菌性食物中毒以 A型肠毒素引起者最多。

五、金黄色葡萄球菌的预防治疗

了解金黄色葡萄球菌相关知识,还可以帮忙我们预防伤口感染和疾病感染。

若皮肤上出现伤口,为避免金黄色葡萄球菌感染,应及时消毒处理伤口。此外,还应根据具体情况再增加预防措施,例如免疫力低下者可在医生指导下加服抗生素,预防全身感染的发生。

如果是预防食源性疾病的发生,可以从以下几点入手:1)保持清洁;2)生熟分开;3)烧熟煮透;4)在安全的温度下保存食物;5)使用安全的水和食物原料。

【结语】结束前,为耐心看到这里的你们点一个赞!即便金黄色葡萄球菌再号称“惹不起”,通过今天这篇分享,也能收获一二。当然,如果你正从事微生物检测相关研究,欢迎来找逗点生物

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